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Lab19

1. PCR이란? 구성요소, 원리, 과정, 조성, protocol, 레시피 Ÿ PCR이란? Polymerase Chain Reaction (중합효소 연쇄반응)의 약자로, DNA 증폭 (복제) 기술이다. 적은 양의 DNA template 로 대량의 DNA를 얻을 수 있다. 이를 이용하여 분자생물학, 의료, 범죄 수사, 생물 분류 등 DNA를 취급하는 작업 전반에 중요한 역할을 하고 있다. Ÿ PCR 구성 요소 1. DNA, RNA template : 증폭 대상이 되는 DNA, RNA 2. PCR Primers : 증폭할 부분을 잡는 짧은 염기서열 3. Taq polymerase : 열에 특별히 강한 유전자 합성효소 (Thermus aquaticus 라는 온천에 사는 세균의 DNA polymerase, 72℃가 최적 온도, 94℃에서도 안정함) 4. dNTP (dATP, dCTP,.. 2024. 4. 3.
Competent cell 만들기, SOB 조성 Competent cell 만들기 bacteria cell (기존에 사용하던 competent cell 10ul) 을 LB 5ml 에 키운다. 37℃ shaking incubator 8h- O.N. 200ml SOB에 1에서 키운 세포를 200ul 정도 넣는다. 2의 SOB에 1M MgSO4, 1M MgCl2를 1:100 으로 넣는다. (final 10mM) 37℃ shaking incubator 에서 O.D 값이 0.3 이 될 때 까지 키운다. centrifugal tube로 옮기고 ICE 10분 안정화 4000rpm 으로 centrifuge 5분 기다리는 동안 ICE와 TB(Transformation buffer) 준비하여 차갑게 유지 centrifuge 돌린 샘플의 상층액을 버리고 TB 10ml 을.. 2024. 4. 2.
competent cell 정의, 종류 competent cell (수용성 세포)란? 외부의 DNA를 삽입할 수 있도록 물리적, 화학적으로 처리한 세포 Transformation competent cell에 외부 DNA가 삽입되는 과정 화학적 방법 CaCl2나 MgCl2 등 salt를 이용하여 negative charge를 띄고 있는 DNA를 neutralization 시켜주는 방법. 고이온 농도에서 키운 세포에 DNA를 넣고 heat shock (42℃)을 주면 DNA가 세포 안으로 삽입되게 된다. 물리적 방법 전기 pulse를 이용하여 세포막 막전위 변화를 주어 DNA 투과를 높이는 방법. Competent cell 종류 1. 유전자 생산 - DH5a : 가장 흔하게 사용되는 E.coli. recA1 mutation 으로 인하여 높은 in.. 2024. 4. 2.
형광 Fluorescence Excitation and Emission 형광(Fluorescence)이란? 빛이나 다른 전자기 복사를 흡수한 물질에 의하여 방출되는 빛으로 발광의 한 형태이다. 물질의 전자가 에너지를 받아 (Excitation) 높은 에너지 준위 (들뜬 상태로) 올라갔다가 곧 낮은 에너지 준위로 내려오면서 빛을 내는 것 (Emission). 자극하는 광은 전자를 활성 상태로 만들고, 물질이 바닥 상태로 돌아가면 광자를 방출하며 형광이 나오게 된다. 전자가 들뜬 상태에서 바닥 상태로 돌아갈 때, 진동 에너지 손실이 일어난다. 파장은 에너지에 반비례 하므로 더 긴 파장으로 이동하게 된다 (Stokes' Law). 따라서 대부분의 경우 방출된 빛은 흡수된 복사보다 파장이 더 길고, 낮은 광자 에너지를 가진다. 이로 인해 방출되는 빛은 흡수되는 빛과 다른 색상이 된.. 2024. 4. 1.
IHC Immunohistochemistry protocol 면역조직화학 프로토콜 * 시작하기 전 Protein 발현 위치를 확인 à protein atlas 등을 이용하여 tissue 별 보고자 하는 protein expression level check Protocol A. Deparaffinization Ÿ 사용할 만큼 EtOH가 충분한지 check 하고 시작. Ÿ 중요한 sample 은 fresh 한 EtOH를 사용하면 좋음. Ÿ 통이 필요한 개수만큼 없기 때문에 100% 통에 95%를 넣어서 사용. Ÿ 중간 쉬는 시간이 없기 때문에 모두 준비해서 시작. 1. Bake the slide at 60℃ for 30 min. -> 가는 동안 paraffin이 굳는 것을 방지하기 위하여 Xylene I 통을 가져와서 바로 넣기. *toxic하니까 주의! 2. Xylene I, 5 mi.. 2024. 3. 29.
Image j nuclear translocation measurement 96well plate 이용, B02~G11 까지 분석 각 well 당 fld1~9 red analysis - nucleus and cytosol //알파벳 B에서 G까지 반복 (b,c,d,e,f,g = 66,67,68,69,70,71) for (charCode = 66; charCode 2023. 10. 28.

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