Competent cell 만들기, SOB 조성

Competent cell 만들기 

1. bacteria cell (기존에 사용하던 competent cell 10ul) 을 LB 5ml 에 키운다. 37℃ shaking incubator 8h- O.N.
2. 200ml SOB에 1에서 키운 세포를 200ul 정도 넣는다. 
3. 2의 SOB에  1M MgSO4, 1M MgCl2를 1:100 으로 넣는다. (final 10mM) 
4. 37℃ shaking incubator 에서 O.D 값이 0.3 이 될 때 까지 키운다. 
5. centrifugal tube로 옮기고 ICE 10분 안정화
6. 4000rpm 으로 centrifuge 5분
7. 기다리는 동안 ICE와 TB(Transformation buffer) 준비하여 차갑게 유지
8. centrifuge 돌린 샘플의 상층액을 버리고 TB 10ml 을 넣고 살살 흔든다. vortex 절대 금지, pipetting 도 하지 말 것. 
9. ICE 10분 안정화
10. 3000rpm centrigue 10분 -- 위의 과정을 반복하여 wash를 3-5 번 반복한다. (8-10)
11.  상층액을 버린후 TB 14.4ml DMSO 1.08ml 넣고 살살 흔든다. (세포 양 보고 용량 결정)
12. E-tube 에 50-200 ul 씩 분주한다.
13. 액체 질소에 넣는다.
14. -80 ℃ 보관

SOB 조성 

Bacto Trypton	20g
Bacto Yeast Extract	5g
5M NaCl	2ml
2M KCl	1.25ml
H2O	up to 1L