Lab/Protocol3 Competent cell 만들기, SOB 조성 Competent cell 만들기 bacteria cell (기존에 사용하던 competent cell 10ul) 을 LB 5ml 에 키운다. 37℃ shaking incubator 8h- O.N. 200ml SOB에 1에서 키운 세포를 200ul 정도 넣는다. 2의 SOB에 1M MgSO4, 1M MgCl2를 1:100 으로 넣는다. (final 10mM) 37℃ shaking incubator 에서 O.D 값이 0.3 이 될 때 까지 키운다. centrifugal tube로 옮기고 ICE 10분 안정화 4000rpm 으로 centrifuge 5분 기다리는 동안 ICE와 TB(Transformation buffer) 준비하여 차갑게 유지 centrifuge 돌린 샘플의 상층액을 버리고 TB 10ml 을.. 2024. 4. 2. IHC Immunohistochemistry protocol 면역조직화학 프로토콜 * 시작하기 전 Protein 발현 위치를 확인 à protein atlas 등을 이용하여 tissue 별 보고자 하는 protein expression level check Protocol A. Deparaffinization 사용할 만큼 EtOH가 충분한지 check 하고 시작. 중요한 sample 은 fresh 한 EtOH를 사용하면 좋음. 통이 필요한 개수만큼 없기 때문에 100% 통에 95%를 넣어서 사용. 중간 쉬는 시간이 없기 때문에 모두 준비해서 시작. 1. Bake the slide at 60℃ for 30 min. -> 가는 동안 paraffin이 굳는 것을 방지하기 위하여 Xylene I 통을 가져와서 바로 넣기. *toxic하니까 주의! 2. Xylene I, 5 mi.. 2024. 3. 29. DNA Mini prep (plasmid prep) 레시피, 원리 Material SolutionⅠ (50 mM glucose, 25 mM Tris HCl (pH 8.0), 10 mM EDTA (pH 8.0)) Solution Ⅱ (0.2 N NaOH , 1% SDS) Solution Ⅲ (5 M Potassium acetate, Glacial acetic acid) or SolutionⅠ (50 mM Tris HCl (pH 8.0), 10 mM EDTA (pH 8.0)) Solution Ⅱ (0.2 N NaOH , 1% SDS) Solution Ⅲ (3 M Potassium acetate (pH5.5), Glacial acetic acid) Recipe SolutionⅠ Tris base 6.06 g Na2EDTA2H2O 3.72 g in 800 ml dH2O Adj.. 2023. 3. 29. 이전 1 다음