BT/Lab10 Western Blot (1) SDS-PAGE 단백질의 발현 여부를 보기위하여 주로 하는 실험이다. 일단 원리는 단백질의 사이즈에 따라 분리하고 antibody 로 특정 단백질을 확인하는 것이다. 먼저 SDS-PAGE에 대하여 알아보겠다! 전체적인 과정은 1. protein sample 준비 2. gel 준비. 3. gel running 4. Transfer 5. blocking 6. Antibody incubation 7. detection and visualization 으로 이루어진다. 1. Protein sample 준비 보통 세포나 조직등에서 protein lysis buffer를 이용하여 protein sample을 얻는다. 단백질은 각각 다른 특성을 가지고 다른 cellular environment 를 가지므로 실험 목적에 맞는 적합한 .. 2021. 5. 22. CRISPR-Cas system / Knock-out cell line 만들기 (2) Selection, sequencing CRISPR - Cas9 system을 이용한 Knock out cell line 만들기 (1) sgRNA design 이 포스팅은 CRIPSR Cas system 을 이용하여 knock out cell line 만들기에 대한 포스팅이다. 이론에 관한 것은 잘 정리된 것이 너무 많기 때문에 PASS하고 cell line 만들 때 고려해야 하는 점등을 위주로 포스 arumyworld.tistory.com 앞의 포스팅에서 sgRNA design에 대해서 다루었다. sgRNA cloning이 끝나면 원하는 세포에 넣어주면 끝인데 하지만 그것은 쉽지 않지... 세세한 과정을 알아보도록 하겠다. sgRNA cloning을 하면서 cell line에 antibotics test를 진행하여야 한다. 내가 사용하는 c.. 2021. 2. 15. CRISPR - Cas9 system / Knock out cell line 만들기 (1) sgRNA design 이 포스팅은 CRIPSR Cas system 을 이용하여 knock out cell line 만들기에 대한 포스팅이다. 이론에 관한 것은 잘 정리된 것이 너무 많기 때문에 PASS하고 cell line 만들 때 고려해야 하는 점등을 위주로 포스팅을 해보려고 한다. CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) 는 prokaryoic organism 에서 발견되는 DNA sequence 이다. 박테리아에 파지나 플라스미드가 들어오게 되면 외부 DNA 조각을 박테리아 유전체 속 반복 서열 사이에 넣게 된다. 이 때 이 반복된 서열을 CRISPR 라고 하며 Cas (CRISPR-associated) proteins이 이를 인지하고 pth.. 2021. 2. 14. 코로나19/COVID19 [SARS-CoV-2] 코로나바이러스 (Coronavirus) positive single stranded RNA 바이러스로서 호흡기와 소화기계 감염을 유발한다. 2003년 사스 (SARS-CoV, severe acute respiratory syndrome) 2015년 메르스 (MERS-CoV, Middle East respiratory syndrome) 그리고 2019년 신종코로나바이러스, 코로나19 (SRAS-CoV-2) 코로나바이러스는 감염병을 일으키는 대표적인 바이러스이다. positive-sense viral RNA 는 mRNA와 같아서 host cell에 즉각적으로 infection이 가능하다. -> 빠른 속도 (influenza virus 는 negative sense RNA virus이다.) RNA virus는.. 2020. 8. 23. 이전 1 2 다음
